Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400216-ACT

ITGB3 codifica l’integrina β3 (CD61), un recettore di adesione transmembrana che forma eterodimeri con αIIb (formando αIIbβ3) o con αV (formando αVβ3) per mediare il legame con ligandi della matrice extracellulare quali fibrinogeno, vitronectina e fibronectina. Attraverso l’assemblaggio delle adesioni focali e la segnalazione outside-in/inside-out, l’integrina β3 coordina l’adesione cellulare, l’aggregazione piastrinica, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione tramite vie che includono FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. L’attività di ITGB3 è centrale per la funzione piastrinica e la formazione del trombo e contribuisce anche alle interazioni tra cellule endoteliali e tumorali e il microambiente. Una segnalazione dell’integrina β3 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’emostasi, dell’infiammazione e a processi che supportano angiogenesi e metastasi in molteplici contesti patologici.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGB3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGB3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β3/ITGB3/CD61. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGB3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β3/ITGB3/CD61 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β3/ITGB3/CD61 nelle cellule tumorali con espressione di ITGB3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.