Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RAcP (m): sc-421101

Présentation

Il1rap code pour IL-1RAcP, un co‑récepteur essentiel qui forme des complexes avec des membres de la famille des récepteurs de l’IL‑1 afin de relayer les signaux initiés par l’IL‑1α/IL‑1β et des ligands apparentés. Lors de l’engagement du récepteur, IL‑1RAcP favorise l’assemblage de complexes de signalisation dépendants de MyD88 qui activent les cascades IRAK–TRAF6, entraînant l’activation des voies NF‑κB et MAPK ainsi que des programmes transcriptionnels en aval contrôlant l’inflammation, les réponses immunitaires innées et la communication stroma–immunité. Dans des modèles murins, une signalisation IL‑1R/IL‑1RAcP altérée est fréquemment utilisée pour étudier les mécanismes à l’origine d’états inflammatoires chroniques, des réponses aux lésions tissulaires et du remodelage amplifié par les cytokines dans divers systèmes d’organes. Comme IL‑1RAcP intègre de multiples entrées de la famille IL‑1, elle est pertinente pour disséquer les interactions entre voies de signalisation (crosstalk) qui façonnent le recrutement des leucocytes, la fonction de barrière et l’expression des gènes inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RAcP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il1rap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il1rap, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il1rap à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-1RAcP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il1rap pour l'étude de la signalisation de IL-1RAcP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Il1rap essentiels à la fonction de IL-1RAcP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il1rap pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-1RAcP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-1RAcP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il1rap. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-1RAcP plasmide HDR (m) et le IL-1RAcP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il1rap pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il1rap définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.