Plasmide Double Nickase (h) IL-10: sc-417060-NIC

L’IL10 humain code l’interleukine‑10 (IL‑10), une cytokine anti‑inflammatoire pléiotrope qui limite l’activation de l’immunité innée et adaptative afin de maintenir l’homéostasie tissulaire. La signalisation de l’IL‑10 via IL10RA/IL10RB active JAK1/TYK2 et, en aval, STAT3, ce qui supprime la transcription pro‑inflammatoire dépendante de NF‑κB et réduit la présentation de l’antigène ainsi que l’expression de molécules de costimulation dans les cellules myéloïdes. Cette voie module la production de cytokines par les macrophages et les cellules dendritiques, influence la polarisation des lymphocytes T et soutient l’intégrité de la barrière épithéliale au niveau des sites muqueux. Une activité d’IL‑10 dérégulée est impliquée dans des affections inflammatoires d’origine immunitaire et dans l’immunopathologie associée aux infections, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la régulation immunitaire.

IL-10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IL10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IL10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IL10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IL10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.