Plasmide CRISPR d'Activation (m) IFN-γ/Interferon gamma: sc-421050-ACT

Le gène murin Ifng code l’interféron gamma (IFN‑γ), un interféron de type II aux effets pléiotropes qui coordonne les réponses immunitaires innée et adaptative en activant les macrophages et en orientant la polarisation des lymphocytes T auxiliaires de type 1 (Th1). L’IFN‑γ signale principalement via IFNGR1/IFNGR2, activant JAK1/JAK2 et STAT1, et induisant des gènes stimulés par l’interféron qui renforcent le traitement et la présentation des antigènes, les défenses antimicrobiennes et les rétrocontrôles immunorégulateurs. Cette cytokine interagit avec des programmes transcriptionnels pilotés par NF‑κB et les IRF, influençant la production de chimiokines, l’expression du CMH et les états de différenciation cellulaire. Une activité dérégulée de l’IFN‑γ est impliquée dans des pathologies inflammatoires et auto-immunes, la susceptibilité hôte‑pathogène, la surveillance immunitaire des tumeurs et des processus neuro-inflammatoires, faisant d’Ifng un nœud central pour les études mécanistiques en immunologie.

IFN-γ/Interferon gamma Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ifng sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFN-γ/Interferon gamma Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ifng dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ifng, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFN-γ/Interferon gamma. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ifng natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFN-γ/Interferon gamma au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFN-γ/Interferon gamma dans les cellules tumorales présentant une expression de Ifng silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.