HSP70-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417733-LAC

HSPA1B codifica lo chaperone inducibile HSP70-2, un componente centrale della risposta cellulare allo shock termico che preserva la proteostasi durante stress termico, ossidativo e infiammatorio. HSP70-2 si lega alle regioni idrofobiche esposte delle proteine nascenti o mal ripiegate per impedirne l’aggregazione e ne supporta il ripiegamento corretto in coordinamento con i co-chaperoni HSP40/DNAJ e con i fattori di scambio dei nucleotidi. Attraverso i suoi ruoli nel controllo qualità delle proteine, nel crosstalk con la risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e nella regolazione dell’apoptosi e della segnalazione immunitaria innata, HSP70-2 influenza le decisioni di sopravvivenza cellulare in condizioni di stress. Un’attività deregolata della famiglia HSP70 è stata associata a stati proteotossici e infiammatori, rendendo HSPA1B un bersaglio utile per studi meccanicistici delle vie di adattamento allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale HSP70-2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HSPA1B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HSP70-2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HSPA1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HSP70-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HSPA1B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.