HPS-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407496

Descripción general

HPS6 codifica la proteína HPS-6, un componente central del complejo 2 de biogénesis de orgánulos relacionados con lisosomas (BLOC-2), que regula la clasificación de carga y el tráfico vesicular hacia orgánulos especializados como los melanosomas y los gránulos densos plaquetarios. A través de su función en el transporte endosomal y la maduración de orgánulos, HPS-6 influye en la localización de proteínas, la dinámica de membranas y las vías de tráfico intracelular que convergen con la función lisosomal. La alteración de HPS6 se asocia con el síndrome de Hermansky–Pudlak tipo 6, un trastorno caracterizado por defectos en orgánulos relacionados con lisosomas y por fenotipos celulares ligados a cambios en la pigmentación y la hemostasia. Los modelos con pérdida de función de HPS6 se utilizan para investigar los mecanismos de biogénesis de orgánulos, la entrega de carga y los programas de tráfico específicos de tipo celular en sistemas celulares humanos relevantes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HPS-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HPS6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HPS6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HPS6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HPS-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HPS6 para la investigación de la señalización de HPS-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HPS6 críticos para la función de HPS-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HPS6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HPS-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HPS-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HPS6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HPS-6 (h) y el plásmido HDR HPS-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HPS6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HPS6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.