HIVEP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410084-ACT

HIVEP3 (humano) codifica um grande fator de transcrição do tipo “zinc finger”, também conhecido como Schnurri-3, que se liga a elementos de DNA semelhantes a κB e modula programas transcricionais dependentes de estímulos. Foi associado à regulação da expressão gênica ligada ao NF-κB e ao controle mais amplo de sinais imunes e inflamatórios, integrando entradas de vias mediadas por receptores para moldar respostas transcricionais a jusante. A atividade de HIVEP3 influencia a diferenciação e a homeostase celulares por meio de controle transcricional específico do contexto, com relevância relatada para desregulação imune e assinaturas de expressão associadas a doenças complexas. Essas propriedades tornam o HIVEP3 um nó útil para estudar redes transcricionais que acoplam sinalização à regulação gênica.

HIVEP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIVEP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HIVEP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIVEP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIVEP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HIVEP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIVEP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HIVEP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HIVEP3 em células tumorais com expressão de HIVEP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.