Plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone H1X (h): sc-411232

Présentation

H1FX code l’histone H1X, une variante d’histone de liaison indépendante de la réplication, qui se fixe à l’ADN nucléosomal et contribue à la compaction de la chromatine de haut niveau ainsi qu’à l’organisation du génome. En modulant l’accessibilité de la chromatine, H1X influence les programmes transcriptionnels, le calendrier de réplication de l’ADN et la coordination des processus de détection et de réparation des dommages à l’ADN. Une composition altérée des histones de liaison peut déplacer les états épigénétiques et affecter les voies impliquées dans le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Une dérégulation de l’architecture de la chromatine et de l’équilibre des variantes d’histones est fréquemment observée dans le cancer et d’autres maladies associées à une instabilité épigénomique, faisant de H1FX un nœud utile pour des études mécanistiques des relations structure–fonction au sein du noyau.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Histone H1X (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène H1FX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du H1FX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert H1FX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Histone H1X.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en H1FX pour l'étude de la signalisation de Histone H1X, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de H1FX essentiels à la fonction de Histone H1X
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de H1FX pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Histone H1X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Histone H1X plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus H1FX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Histone H1X plasmide HDR (h) et le Histone H1X (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie H1FX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles H1FX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.