Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone cluster 1 H1E: sc-402775-ACT

HIST1H1E codifica la histona H1E del clúster 1, un miembro de la familia de histonas de enlace H1 que se une al ADN nucleosomal en los sitios de entrada/salida para favorecer una compactación de la cromatina de orden superior y regular la accesibilidad del genoma. Al influir en el espaciado de los nucleosomas y en la organización de la fibra de cromatina, H1E contribuye al control transcripcional, al momento de la replicación del ADN y a la señalización de la respuesta al daño del ADN. La alteración de la estequiometría de H1 y los estados de cromatina asociados a H1E se estudian en el contexto de la reprogramación epigenética, la diferenciación y la estabilidad genómica, procesos que con frecuencia se ven perturbados en el cáncer y en los trastornos del neurodesarrollo. Como proteína arquitectónica de la cromatina, H1E también es relevante para investigaciones sobre el estrés de replicación, la formación de heterocromatina y la ocupación de factores de transcripción a lo largo del genoma.

Histone cluster 1 H1E El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HIST1H1E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone cluster 1 H1E El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HIST1H1E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HIST1H1E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone cluster 1 H1E. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HIST1H1E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone cluster 1 H1E en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone cluster 1 H1E en células tumorales con expresión de HIST1H1E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.