hippocalcin Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420938-LAC

O gene Hpca de camundongo codifica a hippocalcina, uma proteína ligadora de Ca2+ com motivos EF-hand, enriquecida em neurônios, pertencente à família dos sensores neuronais de cálcio, que acopla transientes intracelulares de cálcio à sinalização a jusante. A hippocalcina participa de processos dependentes da atividade sináptica, incluindo a modulação da excitabilidade de membrana, a homeostase de cálcio e o tráfego relacionado a vesículas, e tem sido associada a vias que moldam a plasticidade sináptica de longa duração em circuitos hipocampais. Por meio de um comportamento semelhante ao “switch” cálcio-miristoíla e de interações com parceiros de sinalização neuronal, ela pode influenciar respostas reguladas por Ca2+, como a sinalização por cAMP, a dinâmica de receptores e programas de expressão gênica dependentes de atividade. A desregulação da sinalização associada à hippocalcina tem sido estudada no contexto de respostas neuronais ao estresse e de fenótipos relevantes para neurodegeneração, sustentando seu uso como um ponto de entrada molecular para mecanismos subjacentes à disfunção cognitiva e sináptica.

As Partículas de Ativação Lentivirais hippocalcin (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Hpca numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais hippocalcin (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Hpca, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de hippocalcin. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Hpca e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.