HIPK3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406669

Panoramica

La protein chinasi 3 interagente con l’homeodominio (HIPK3) è una chinasi serina/treonina che integra segnali di stress e dello sviluppo fosforilando regolatori della trascrizione, contribuendo così a modellare programmi di espressione genica legati alle decisioni sul destino cellulare. HIPK3 è stata implicata nella modulazione della segnalazione apoptotica, delle risposte al danno del DNA e degli output trascrizionali associati a TGF-β/BMP attraverso interazioni con proteine homeobox e altri fattori nucleari. Attraverso questi ruoli, HIPK3 può influenzare proliferazione, differenziamento e tolleranza allo stress cellulare, processi spesso alterati nella biologia del cancro e nei contesti di rimodellamento tissutale. Un’attività o un’espressione disregolata di HIPK3 è stata inoltre associata a variazioni nella segnalazione infiammatoria e nell’omeostasi metabolica, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico in studi incentrati su specifiche vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HIPK3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HIPK3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HIPK3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HIPK3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HIPK3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HIPK3 per lo studio della segnalazione di HIPK3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HIPK3 critici per la funzione di HIPK3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HIPK3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HIPK3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HIPK3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HIPK3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HIPK3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HIPK3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HIPK3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HIPK3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.