G_{β 1} CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420606-ACT

マウスGnb1は、三量体Gタンパク質のGβ1サブユニットをコードしており、活性化されたGPCRを下流エフェクターへと結び付ける際にGγと必須の複合体を形成します。Gβ1を含む複合体は、アデニル酸シクラーゼ/cAMP、ホスホリパーゼCβ/Ca²⁺フラックス、イオンチャネル調節、MAPKシグナル伝達などの経路へのシグナル伝播を制御し、その結果として神経伝達、感覚シグナル、ホルモン応答を形作ります。セカンドメッセンジャー動態および受容体脱感作機構の制御を通じて、Gβ1は興奮性、増殖、遊走などを含む細胞状態の意思決定に影響を与えます。GPCR–Gタンパク質シグナル伝達の破綻やGNB1活性の変化は、実験モデルにおいて神経発達および神経学的表現型、ならびにがん化や代謝過程に関連するより広範なシグナル不均衡と関連付けられています。

Gβ 1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gnb1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gβ 1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gnb1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGnb1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gβ 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGnb1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGβ 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGnb1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGβ 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。