Plásmido Doble Nickase (h) G_{α t1}: sc-401559-NIC

GNAT1 codifica la subunidad α de transducina específica de los bastones, Gαt1, una proteína G heterotrimérica que acopla la rodopsina activada a la fosfodiesterasa de cGMP (PDE6) durante la fototransducción. Tras la estimulación lumínica, Gαt1 intercambia GDP por GTP y propaga una señalización que reduce el cGMP, modula la actividad de los canales activados por nucleótidos cíclicos y determina el potencial de membrana del fotorreceptor y su salida sináptica. Esta cascada mediada por GPCR está estrechamente regulada por la hidrólisis de GTP y la reasociación con las subunidades βγ, integrando la amplificación de la señal y la cinética de recuperación en los bastones de la retina. La desregulación de la señalización dependiente de GNAT1 se ha asociado con disfunción retiniana hereditaria, lo que respalda su uso como diana para estudios mecanísticos de la señalización visual y la fisiología de los fotorreceptores.

Gα t1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNAT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNAT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNAT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNAT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.