GOLGB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-432441-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GOLGB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GOLGB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und GOLGB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Golgb1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GOLGB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432441-NIC | 20 µg | $410.00 |
Golgb1 kodiert das Gerüstprotein der Golgin-Familie GOLGB1 (Giantin), eine große Coiled-Coil-Komponente der Golgi-Matrix, die zur Aufrechterhaltung der Architektur des Golgi-Ribbons beiträgt und das Andocken von Vesikeln organisiert. GOLGB1 ist in Transportwege eingebunden, die den ER-zu-Golgi-Transport, die Weiterleitung von Fracht innerhalb des Golgi sowie die glykosylierungsabhängige Reifung sekretorischer und membranständiger Proteine unterstützen. Über seine Rolle in der Golgi-Homöostase beeinflusst Golgb1 Prozesse wie die Ablagerung der extrazellulären Matrix, die Oberflächenexpression von Rezeptoren und die polarisierte Sekretion, die für Entwicklung und Gewebeorganisation zentral sind. Störungen von strukturellen Golgi-Proteinen, einschließlich Giantin, wurden mit Defekten der Ziliogenese und der Bindegewebsbiologie in Verbindung gebracht, wodurch Golgb1 ein nützliches Ziel für die Untersuchung organellenabhängiger Mechanismen mit Relevanz für Entwicklungsphänotypen ist.
GOLGB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Golgb1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Golgb1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Golgb1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Golgb1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.