Plásmido CRISPR de Activación (h) GIPC2: sc-405087-ACT

GIPC2 (proteína que interactúa con GAIP, extremo C 2) es un adaptador que contiene un dominio PDZ e interviene en la organización de complejos de señalización asociados a la membrana y en la coordinación del tráfico de receptores. A través de interacciones proteína–proteína mediadas por PDZ, GIPC2 puede influir en la clasificación endocítica, el transporte vesicular y la propagación de señales aguas abajo que determinan la polaridad celular, la migración y los programas de control del crecimiento. Los patrones de expresión alterados de los adaptadores de la familia GIPC se han vinculado con circuitos de señalización desregulados en la biología del cáncer y en otros trastornos que implican un recambio anómalo de receptores, lo que respalda la investigación de GIPC2 en estados transcripcionales y fenotípicos dependientes del contexto. El estudio de la regulación de GIPC2 ayuda a aclarar cómo las proteínas andamiaje acoplan la dinámica de los receptores de superficie a las vías intracelulares que gobiernan el comportamiento celular.

GIPC2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GIPC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GIPC2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GIPC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GIPC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GIPC2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GIPC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GIPC2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GIPC2 en células tumorales con expresión de GIPC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.