GIPC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405087-ACT

GIPC2 (GAIP-interagierendes Protein, C‑Terminus 2) ist ein Adapterprotein mit PDZ-Domäne, das an der Organisation membranassoziierter Signalkomplexe und an der Koordination des Rezeptor-Transports beteiligt ist. Über PDZ‑vermittelte Protein‑Protein‑Interaktionen kann GIPC2 die endozytotische Sortierung, den vesikulären Transport und die nachgeschaltete Signalweiterleitung beeinflussen, die Zellpolarität, Migration und Programme der Wachstumskontrolle prägen. Veränderte Expressionsmuster von Adapterproteinen der GIPC‑Familie wurden mit fehlregulierten Signalnetzwerken in der Krebsbiologie und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen ein abweichender Rezeptorumsatz vorliegt, was die Untersuchung von GIPC2 in kontextabhängigen transkriptionellen und phänotypischen Zuständen unterstützt. Die Erforschung der GIPC2‑Regulation hilft zu klären, wie Gerüstproteine die Dynamik von Oberflächenrezeptoren mit intrazellulären Signalwegen koppeln, die das zelluläre Verhalten steuern.

GIPC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GIPC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GIPC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GIPC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GIPC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GIPC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GIPC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GIPC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GIPC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GIPC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.