GH-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401171

Panoramica

Il gene umano **GH2** codifica l’ormone della crescita 2 (GH-2), un ormone peptidico di origine ipofisaria che attiva la segnalazione mediata dal recettore dell’ormone della crescita per regolare la crescita somatica, la ripartizione dei nutrienti e l’omeostasi metabolica. L’attività delle vie a valle include programmi trascrizionali JAK2/STAT con cross-talk con la regolazione dell’asse IGF, influenzando proliferazione cellulare, differenziamento e rimodellamento tissutale. Alterazioni della segnalazione dell’ormone della crescita sono state associate a fenotipi endocrini e metabolici e sono rilevanti per lo studio del controllo della crescita deregolato in contesti patologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GH-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GH-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GH2 per lo studio della segnalazione di GH-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GH2 critici per la funzione di GH-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GH-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GH-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GH-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GH-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.