Particules Lentivirales d'Activation (m) GATA3: sc-420495-LAC

Le gène murin **Gata3** code **GATA3**, un facteur de transcription à doigt de zinc qui se fixe sur des motifs GATA afin de contrôler des programmes d’expression génique spécifiques de lignées au cours de l’embryogenèse et du développement immunitaire. Dans les cellules hématopoïétiques, GATA3 est un régulateur central de la différenciation des lymphocytes T, notamment de la polarisation Th2, et coordonne l’expression de cytokines et de récepteurs via le remodelage des enhancers et des modifications de l’accessibilité de la chromatine. GATA3 contribue également à la différenciation épithéliale et à la fonction barrière, reliant le contrôle transcriptionnel aux signalisations du développement et à l’homéostasie tissulaire. Des réseaux transcriptionnels dépendants de GATA3 dérégulés servent de modèles mécanistiques de déséquilibre immunitaire, de phénotypes inflammatoires et de programmes oncogéniques ou suppresseurs de tumeur dépendants du contexte dans des systèmes murins.

Les particules d'activation lentivirales GATA3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gata3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GATA3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gata3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GATA3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gata3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.