Particules Lentivirales d'Activation (h) GATA3: sc-400134-LAC

GATA3 code un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie au motif consensus GATA afin de réguler des programmes géniques spécifiant les lignages, avec des rôles majeurs dans la différenciation des lymphocytes T, le développement épithélial et la biologie de la glande mammaire. Dans les cellules immunitaires, GATA3 agit comme un nœud clé de la polarisation Th2 en coordonnant la transcription des cytokines et l’accessibilité de la chromatine, en intégrant des signaux au sein de réseaux transcriptionnels dépendants de JAK/STAT et des cytokines. Dans les contextes épithéliaux, il contribue à la différenciation et au maintien de l’identité cellulaire, en influençant des circuits transcriptionnels qui croisent la signalisation des récepteurs hormonaux et les voies du développement. Une activité ou une expression dérégulée de GATA3 a été associée à des réponses immunitaires altérées ainsi qu’à des caractéristiques spécifiques de sous-types de cancers du sein et d’autres cancers épithéliaux, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et une cible mécanistique pour l’étude de la différenciation et de la régulation transcriptionnelle.

Les particules d'activation lentivirales GATA3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GATA3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GATA3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GATA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GATA3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GATA3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.