galectin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421416-ACT

O gene murino Lgals3 codifica a galectina-3, uma lectina ligante de β-galactosídeos que se localiza no citoplasma, no núcleo, na superfície celular e no meio extracelular, regulando interações célula–célula e célula–matriz. A galectina-3 modula a sinalização dependente de glicanos que influencia adesão, migração, fagocitose e respostas de citocinas inflamatórias, com papéis documentados na ativação de macrófagos e na biologia de fibroblastos. Ela interage com vias que controlam resistência à apoptose, endocitose e sinalização imune inata, incluindo respostas impulsionadas por receptores de reconhecimento de padrões. A expressão desregulada de galectina-3 está associada à remodelação tecidual e fibrose, às interações tumor–estroma e a estados inflamatórios crônicos, sustentando seu uso como um nó mecanístico em sistemas de modelo relevantes para doenças.

galectin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lgals3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

galectin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lgals3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lgals3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de galectin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lgals3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de galectin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via galectin-3 em células tumorais com expressão de Lgals3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.