Plasmide Double Nickase (h) GALC: sc-401025-NIC

Le gène humain **GALC** code la galactocérébrosidase, une hydrolase lysosomale qui clive le galactosylcéramide et des sphingolipides apparentés, contribuant au renouvellement des lipides de la myéline et, plus largement, au catabolisme des sphingolipides. L’activité de GALC participe aux voies de recyclage dépendantes des lysosomes et aide à maintenir l’homéostasie des lipides membranaires dans les oligodendrocytes, les cellules de Schwann et d’autres types de cellules neurales. Une altération de la fonction de GALC perturbe le traitement lysosomal des sphingolipides et est associée à une pathologie neurodégénérative de surcharge lysosomale, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier la myélinisation, la neuroinflammation et les réponses au stress cellulaire. Des modèles in vitro perturbant GALC sont couramment utilisés pour explorer la biologie des lysosomes, le remodelage du métabolisme lipidique ainsi que les conséquences transcriptionnelles et protéostatiques en aval.

GALC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GALC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GALC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GALC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GALC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.