GALC Double Nickase Plasmid (h): sc-401025-NIC

Das humane GALC kodiert die Galaktocerebrosidase, eine lysosomale Hydrolase, die Galaktosylceramid und verwandte Sphingolipide spaltet und damit den Umsatz von Myelinlipiden sowie den allgemeinen Sphingolipidabbau unterstützt. Die GALC-Aktivität trägt zu lysosomenabhängigen Recyclingwegen bei und hilft, die Homöostase von Membranlipiden in Oligodendrozyten, Schwann-Zellen und anderen neuralen Zelltypen aufrechtzuerhalten. Eine gestörte GALC-Funktion verändert die lysosomale Sphingolipidverarbeitung und ist mit neurodegenerativer lysosomaler Speicherpathologie verknüpft, was einen mechanistischen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Myelinisierung, Neuroinflammation und zellulären Stressantworten liefert. In-vitro-Modelle, in denen GALC gezielt perturbiert wird, werden häufig eingesetzt, um die Lysosomenbiologie, das Remodeling des Lipidstoffwechsels sowie nachgelagerte transkriptionelle und proteostatische Konsequenzen zu analysieren.

GALC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GALC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GALC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GALC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GALC-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.