Plasmide CRISPR/Cas9 KO GALC (h): sc-401025

Présentation

GALC code la galactocérébrosidase, une hydrolase lysosomale qui catabolise des galactolipides tels que la galactosylcéramide et la psychosine, contribuant au renouvellement des sphingolipides et à l’homéostasie lipidique de la myéline. En participant au recyclage des lipides membranaires dépendant des lysosomes, GALC établit un lien entre la fonction lysosomale et des voies plus larges du métabolisme des sphingolipides, des réponses au stress cellulaire et de la physiologie neurogliale. Une activité altérée de GALC est associée à une mauvaise gestion de la psychosine et à une perturbation de l’équilibre des lipides liés à la myéline, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude des mécanismes des leucodystrophies et des processus neurodégénératifs dépendants des lysosomes. Dans les cellules humaines, GALC constitue un nœud utile pour analyser comment le catabolisme lysosomal des lipides façonne la composition des membranes, le trafic intracellulaire et la viabilité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GALC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GALC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GALC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GALC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GALC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GALC pour l'étude de la signalisation de GALC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GALC essentiels à la fonction de GALC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GALC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GALC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GALC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GALC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GALC plasmide HDR (h) et le GALC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GALC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GALC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.