Fyn Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-420431-ACT-2

O gene Fyn do camundongo codifica uma tirosina quinase não receptora da família Src que atua como um polo proximal de sinalização a jusante de receptores imunes, integrinas e receptores de fatores de crescimento, regulando o controle dependente de fosforilação da dinâmica do citoesqueleto, da adesão celular, da migração e da proliferação. Em células T e outras linhagens hematopoéticas, a Fyn contribui para a sinalização do TCR e para a ativação imune por meio de vias que incluem MAPK/ERK e PI3K–AKT, além de modular complexos de fosfatases e adaptadores; já no sistema nervoso, influencia a sinalização sináptica e processos relacionados à mielinização. A atividade desregulada de Fyn tem sido associada a respostas inflamatórias alteradas, à sinalização ligada à neurodegeneração e a redes de sinalização oncogênicas em sistemas modelo, tornando-a relevante para estudos de regulação imune, função neuronal e biologia tumoral. A edição gênica de Fyn em camundongos auxilia a dissecar mecanisticamente vias dependentes de quinases, redes de fosforilação e fenótipos específicos de tipo celular in vitro e in vivo.

Fyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fyn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fyn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fyn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fyn. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fyn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fyn no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fyn em células tumorais com expressão de Fyn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.