FOXP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417494-ACT

FOXP2はフォークヘッドボックス型の転写因子をコードしており、神経細胞の分化、神経突起の伸長、シナプス可塑性に必要な遺伝子制御プログラムを統括します。運動学習や発声に関与する皮質―線条体回路および小脳回路において、とりわけ重要な役割を担っています。DNA結合性の制御因子として、FOXP2はクロマチン状態、RNAプロセシング、活動依存性シグナル伝達を制御する転写ネットワークを調節し、神経発達の軌跡を形作ります。遺伝的多様性やFOXP2の発現量（用量）の変化は、発話・言語障害や、より広範な神経発達表現型と関連づけられており、神経回路機能に対する転写制御を解明するうえで有用な結節点となります。FOXP2を実験的に操作することで、ヒト細胞モデルにおける転写因子駆動の系譜（ライン）指定や、下流経路の再編成に関する研究が可能になります。

FOXP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FOXP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FOXP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFOXP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFOXP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。