Flotillin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420381

Visão geral

Flot1 codifica a flotilina-1, uma proteína scaffolding conservada associada a lipid rafts, enriquecida na membrana plasmática e em compartimentos endossomais, onde ajuda a organizar microdomínios para a transdução de sinais. A flotilina-1 participa da endocitose independente de clatrina, do tráfego de membranas e da remodelação do citoesqueleto, influenciando a internalização de receptores e vias de sinalização a jusante, incluindo redes MAPK/ERK e de quinases da família Src. Em células de camundongo, a flotilina-1 tem sido associada à regulação da adesão e migração celular, à sinalização de receptores imunes e à função neuronal, por meio de seus papéis na organização de membranas e na dinâmica vesicular. A biologia da flotilina desregulada tem sido associada a fenótipos proliferativos e migratórios alterados e vem sendo estudada no contexto de sinalização relacionada ao câncer, neurodegeneração e processos inflamatórios, como um modulador mecanístico, e não como um efetor direto.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Flotillin-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Flot1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Flot1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Flot1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Flotillin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Flot1 para a investigação da sinalização de Flotillin-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Flot1 críticos para a função Flotillin-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Flot1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Flotillin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Flotillin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Flot1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Flotillin-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Flotillin-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Flot1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Flot1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.