FLAD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406725

Panoramica

FLAD1 codifica la flavina adenina dinucleotide sintetasi 1, un enzima bifunzionale che catalizza l’adenilazione dell’FMN per generare FAD, un cofattore redox fondamentale richiesto da numerose flavoproteine mitocondriali e citosoliche. Controllando la disponibilità cellulare di FAD, FLAD1 supporta il metabolismo ossidativo, le reazioni di trasferimento di elettroni, la β-ossidazione degli acidi grassi e, più in generale, l’omeostasi mitocondriale, collegando il metabolismo della riboflavina derivata dai micronutrienti alla produzione di energia e all’equilibrio redox. Un’alterazione della sintesi di FAD può perturbare le vie dipendenti dalle flavoproteine, modificare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e compromettere la capacità bioenergetica. Evidenze genetiche e funzionali nell’uomo collegano la disfunzione di FLAD1 a errori congeniti del metabolismo delle flavine e a fenotipi di malattia mitocondriale, rendendolo rilevante per studi sullo stress metabolico e sulla biologia dei mitocondri.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FLAD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FLAD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FLAD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FLAD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FLAD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FLAD1 per lo studio della segnalazione di FLAD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FLAD1 critici per la funzione di FLAD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FLAD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FLAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FLAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FLAD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FLAD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FLAD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FLAD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FLAD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.