Fibulin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401978

Visão geral

EFEMP1 codifica a fibulina-3, uma glicoproteína secretada da matriz extracelular que se associa às fibras elásticas e a componentes da membrana basal para regular a montagem da matriz, a adesão célula–matriz e a remodelação tecidual. A fibulina-3 modula a atividade de proteases e a renovação da matriz extracelular, incluindo interações que influenciam a remodelação mediada por MMP/ADAMTS, e tem sido relacionada a contextos de sinalização como TGF-β/SMAD, que coordenam processos de fibrose e programas epitélio–mesenquimais. Em tecidos humanos, a expressão de EFEMP1 é relevante para a homeostase vascular e ocular, e níveis alterados de fibulina-3 têm sido associados a fenótipos degenerativos da retina e a mudanças na arquitetura estromal na biologia do câncer. Esses papéis tornam EFEMP1 um ponto de partida útil para estudar a regulação da matriz extracelular, redes de proteínas secretadas e o comportamento celular dependente do microambiente.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EFEMP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EFEMP1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EFEMP1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Fibulin-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EFEMP1 para a investigação da sinalização de Fibulin-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EFEMP1 críticos para a função Fibulin-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EFEMP1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Fibulin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Fibulin-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EFEMP1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Fibulin-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Fibulin-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EFEMP1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EFEMP1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.