fibrillin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406714
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- fibrillin-2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico fibrillin-2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: fibrillin-2 Anticuerpo (H-10): sc-393968
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
fibrillin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406714 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FBN2 codifica la fibrilina-2, una gran glucoproteína de la matriz extracelular que se polimeriza formando microfibrillas y contribuye al ensamblaje de las fibras elásticas y a la arquitectura del tejido conectivo. Las microfibrillas que contienen fibrilina-2 proporcionan soporte estructural y regulan la biodisponibilidad de factores de crecimiento, influyendo en vías de señalización como TGF-β y BMP, que gobiernan la morfogénesis y la homeostasis tisular. Mediante interacciones con integrinas y proteínas asociadas a la matriz, la fibrilina-2 modula la adhesión celular, la mecanotransducción y la remodelación de la matriz extracelular. Las alteraciones genéticas de FBN2 se asocian con fenotipos congénitos del tejido conectivo, lo que la hace relevante para estudios de biología del desarrollo de la matriz y de señalización desregulada de factores de crecimiento.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO fibrillin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FBN2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FBN2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FBN2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína fibrillin-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FBN2 para la investigación de la señalización de fibrillin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FBN2 críticos para la función de fibrillin-2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FBN2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido fibrillin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido fibrillin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FBN2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR fibrillin-2 (h) y el plásmido HDR fibrillin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FBN2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FBN2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.