Plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-1 (m): sc-420296

Présentation

Le gène murin Fbn1 code la fibrilline‑1, une glycoprotéine majeure de la matrice extracellulaire qui s’assemble en microfibrilles afin de fournir un échafaudage aux fibres élastiques et de réguler la biomécanique des tissus. Les microfibrilles de fibrilline‑1 coordonnent la biodisponibilité des facteurs de croissance, notamment en modulant la séquestration du complexe latent de TGF‑β et les sorties de signalisation qui influencent l’homéostasie vasculaire, squelettique et des tissus conjonctifs. Grâce à ces interactions entre matrice et signalisation, Fbn1 intervient dans des processus tels que l’organisation de la matrice extracellulaire, la mécanotransduction et la morphogenèse du développement. L’altération de la fonction de la fibrilline‑1 est largement utilisée pour modéliser les microfibrillopathies et des phénotypes du tissu conjonctif pertinents pour le remodelage cardiovasculaire et l’intégrité musculosquelettique dans des systèmes expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fbn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fbn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fbn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine fibrillin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fbn1 pour l'étude de la signalisation de fibrillin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fbn1 essentiels à la fonction de fibrillin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fbn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le fibrillin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le fibrillin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fbn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le fibrillin-1 plasmide HDR (m) et le fibrillin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fbn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fbn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.