FAT1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420291-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FAT1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FAT1 Double-Nickase-Plasmid (m) und FAT1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fat1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FAT1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420291-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Fat1 kodiert FAT1, ein atypisches Cadherin, das Zell-Zell-Adhäsion, Polarität und gerichtete Migration reguliert, indem es die Dynamik des Aktinzytoskeletts und Komponenten des Hippo-Signalwegs koordiniert. FAT1 trägt zur planaren Zellpolarität und zur Gewebemorphogenese bei, indem es die Organisation von Zellkontakten und membranassoziierte Signale beeinflusst, die die epitheliale Architektur formen. Eine Störung FAT1-abhängiger Adhäsions- und Polaritätsprogramme wurde in krankheitsrelevanten Kontexten mit Entwicklungsanomalien und veränderter Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht, was FAT1 zu einem nützlichen Ansatzpunkt macht, um zu untersuchen, wie mechanische und signalvermittelnde Netzwerke zusammenwirken, um die Gewebeintegrität zu steuern. In Mausmodellen und Zellsystemen bietet FAT1 einen gut zugänglichen Einstiegspunkt zur Untersuchung von Signalwegen, die junctionale Cadherine, zytoskelettales Remodeling und kontaktabhängige Regulation der Proliferation miteinander verknüpfen.
FAT1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fat1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fat1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fat1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fat1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.