Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAM26F: sc-405728-ACT

FAM26F code une petite protéine transmembranaire impliquée dans la biologie des cellules immunitaires et les réponses associées à l’interféron, avec une expression enrichie dans les lignées hématopoïétiques et inductible sous l’effet de signaux inflammatoires. Des liens fonctionnels rapportés situent FAM26F dans des processus qui modulent l’activation des leucocytes, la communication intercellulaire et les sorties de signalisation immunitaire en interaction avec des voies dépendantes des cytokines. Une expression altérée de FAM26F a été observée dans des contextes de maladies liées à l’immunité et dans des microenvironnements tumoraux immunitaires, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique dans les études d’immunorégulation. Par conséquent, FAM26F suscite un intérêt pour analyser la manière dont les programmes stimulés par l’interféron et la signalisation associée aux membranes contribuent aux phénotypes immunitaires et aux états transcriptionnels associés aux maladies.

FAM26F Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAM26F sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAM26F Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAM26F dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAM26F, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAM26F. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAM26F natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAM26F au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAM26F dans les cellules tumorales présentant une expression de FAM26F silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.