FAM186A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-414163-ACT-2

O gene humano FAM186A codifica uma proteína pouco caracterizada, implicada por dados de expressão e de associação genética em programas regulatórios específicos de tipos celulares e na homeostase tecidual. Embora sua função molecular precisa ainda não esteja esclarecida, o FAM186A é comumente estudado no contexto de redes de sinalização intracelular e de controle transcricional que influenciam a diferenciação celular e respostas adaptativas ao estresse. Variantes ou expressão desregulada de FAM186A foram relatadas em conjuntos de dados ligados a características complexas de doenças, o que motiva a investigação de sua contribuição para mecanismos patogênicos por meio da genômica funcional. A edição gênica de FAM186A viabiliza estudos de perda e ganho de função, mapeamento de vias e análise de perfis fenotípicos em modelos de células humanas, para esclarecer efeitos a jusante sobre processos celulares e assinaturas moleculares relevantes para doenças.

FAM186A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM186A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM186A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM186A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM186A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM186A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM186A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM186A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM186A em células tumorais com expressão de FAM186A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.