Ets-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423871

Panoramica

Il gene Ets2 del topo codifica il fattore di trascrizione della famiglia ETS Ets-2, un regolatore che si lega al DNA e modula programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento, sopravvivenza e rimodellamento della matrice extracellulare. Ets-2 integra segnali a valle di MAPK/ERK e di cascate chinasiche correlate, consentendo risposte trascrizionali dipendenti dallo stimolo che modellano l’attivazione delle cellule immunitarie, i processi di sviluppo e l’omeostasi tissutale. Un’attività di ETS2 deregolata è stata associata ad alterazioni nell’espressione di geni infiammatori, a comportamenti anomali di cellule stromali ed epiteliali e a reti trascrizionali oncogene in diversi sistemi modello. In quanto regolatore trascrizionale nodale, Ets-2 viene comunemente studiato per il suo ruolo nel controllo trascrizionale di citochine, metalloproteinasi della matrice e geni associati al ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ets-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ets2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ets2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ets2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ets-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ets2 per lo studio della segnalazione di Ets-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ets2 critici per la funzione di Ets-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ets2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ets-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ets-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ets2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ets-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ets-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ets2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ets2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.