Plasmide Double Nickase (h) emerin: sc-401048-NIC

EMD code pour l’émérine, une protéine de la membrane nucléaire interne qui se lie aux lamines et à des partenaires portant un domaine LEM afin d’organiser la lamina nucléaire et de relier la chromatine à la périphérie du noyau. L’émérine participe au couplage nucléo‑cytosquelettique via le complexe LINC, régule la mécanotransduction et influence des programmes transcriptionnels impliqués dans la différenciation musculaire et le contrôle du cycle cellulaire. La perturbation de l’architecture nucléaire dépendante de l’émérine est associée à une altération de la stabilité du génome, à une signalisation aberrante et à des modifications de la mécanique cellulaire. Des variants d’EMD sont associés à la dystrophie musculaire d’Emery–Dreifuss liée à l’X et à des phénotypes apparentés de laminopathies, ce qui en fait un locus utile pour étudier la biologie de l’enveloppe nucléaire et la régulation génique en réponse au stress.

emerin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EMD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EMD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EMD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EMD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.