Plásmido Doble Nickase (h) elastin: sc-400640-NIC

ELN codifica la elastina, una proteína fundamental de la matriz extracelular que se ensambla en fibras elásticas para aportar retroceso y resiliencia en arterias, pulmón y piel. Los monómeros de elastina se secretan y se entrecruzan durante la elastogénesis mediante interacciones con andamiajes microfibrilares y la maduración mediada por la lisil oxidasa, lo que sustenta la biomecánica tisular y la mecanotransducción. Las alteraciones en la abundancia o la organización de la elastina influyen en la remodelación vascular y en la homeostasis de la matriz extracelular, e intersectan con vías que regulan el fenotipo de las células de músculo liso y la integridad del tejido conectivo. La disfunción de ELN y la fragmentación de las fibras elásticas se asocian con trastornos hereditarios y adquiridos de los tejidos vasculares y conectivos, lo que la convierte en un locus clave para estudiar la biología de la matriz.

elastin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.