elastin Plasmide Double Nickase (h): sc-400640-NIC

ELN codifica l’elastina, una proteina fondamentale della matrice extracellulare che si assembla in fibre elastiche per garantire ritorno elastico e resilienza in arterie, polmone e cute. I monomeri di elastina vengono secreti e reticolati durante l’elastogenesi attraverso interazioni con impalcature microfibrillari e la maturazione mediata dalla lisil ossidasi, sostenendo la biomeccanica tissutale e la meccano-trasduzione. Alterazioni nella quantità o nell’organizzazione dell’elastina influenzano il rimodellamento vascolare e l’omeostasi della matrice extracellulare, intersecandosi con vie che regolano il fenotipo delle cellule muscolari lisce e l’integrità del tessuto connettivo. La disfunzione di ELN e la frammentazione delle fibre elastiche sono associate a patologie ereditarie e acquisite dei tessuti vascolari e connettivi, rendendolo un locus chiave per lo studio della biologia della matrice.

elastin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.