Plásmido CRISPR de Activación (h) EBF4: sc-402438-ACT

EBF4 (factor temprano de células B 4) codifica un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice dentro de la familia EBF, que se une al ADN y coordina programas de expresión génica restringidos a linajes celulares. Aunque está menos caracterizado que otros parálogos de EBF, EBF4 se ha implicado en la regulación de redes transcripcionales vinculadas a la diferenciación celular, el patrón del desarrollo y el mantenimiento de la identidad celular mediante su ocupación de potenciadores y promotores. Al moldear estados de cromatina accesible y las salidas transcripcionales, EBF4 puede influir en procesos como el control de la proliferación, la adaptación metabólica y la expresión génica sensible al estrés. La desregulación de los circuitos transcripcionales de la familia EBF se ha asociado con estados de diferenciación aberrantes y con reprogramación transcripcional relevante para enfermedad, lo que convierte a EBF4 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de redes de regulación génica.

EBF4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EBF4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EBF4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EBF4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EBF4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EBF4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EBF4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EBF4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EBF4 en células tumorales con expresión de EBF4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.