E2F-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400934-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- E2F-3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase E2F-3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase E2F-3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para E2F3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:E2F-3 Anticorpo (PG30): sc-56665
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
E2F-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
E2F-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
E2F3 codifica o fator de transcrição humano E2F-3, um regulador central da progressão do ciclo celular que controla a expressão de genes necessários para a transição G1/S, a replicação do DNA e a entrada na fase S. A atividade do E2F-3 é moldada pelo eixo RB/E2F, integrando a sinalização mitogênica com o controle de checkpoints para coordenar a proliferação e a manutenção do genoma. Por meio de programas transcricionais ligados a ciclinas, fatores de licenciamento da replicação e componentes de reparo do DNA, o E2F-3 influencia o crescimento celular, a senescência e a apoptose sob estresse. A desregulação da expressão de E2F3 ou do controle da via RB a montante é frequentemente associada a fenótipos de proliferação aberrante e é estudada no contexto da sinalização oncogênica e da disrupção de redes supressoras de tumor.
E2F-3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus E2F3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de E2F3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função E2F3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com E2F3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.