E-Selectin/CD62E/SELE Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400452-ACT

SELE codifica per l’E-selectina (CD62E), una molecola di adesione endoteliale inducibile che viene rapidamente sovraregolata da citochine infiammatorie come TNF-α e IL-1β attraverso vie di segnalazione dipendenti da NF-κB e MAPK. L’E-selectina di superficie media l’ancoraggio iniziale e il rolling dei leucociti sull’endotelio attivato legandosi a ligandi sialilati e fucosilati, coordinando l’extravasazione leucocitaria durante l’infiammazione acuta e cronica. Questa cascata di adesione si interseca con programmi di attivazione vascolare che influenzano la permeabilità endoteliale, la presentazione di citochine/chemochine e il successivo arresto stabile mediato dalle integrine. L’espressione disregolata di SELE è spesso studiata in modelli di infiammazione vascolare e disfunzione endoteliale rilevanti per l’aterosclerosi, il danno da ischemia-riperfusione, l’infiammazione autoimmune e l’angiogenesi associata ai tumori.

E-Selectin/CD62E/SELE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELE senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

E-Selectin/CD62E/SELE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELE nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELE, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di E-Selectin/CD62E/SELE. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELE nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da E-Selectin/CD62E/SELE nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via E-Selectin/CD62E/SELE nelle cellule tumorali con espressione di SELE silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.