Plásmido Doble Nickase (h) E-cadherin: sc-400031-NIC

CDH1 codifica la E‑cadherina, una proteína de las uniones adherentes dependiente de Ca2+ que media la adhesión homofílica célula–célula y mantiene la polaridad epitelial y la arquitectura tisular. Mediante su enlace con β‑catenina, p120‑catenina y el citoesqueleto de actina, la E‑cadherina coordina la remodelación de las uniones, la inhibición por contacto y la mecanotransducción, y modula de forma indirecta la señalización Wnt/β‑catenina al influir en la disponibilidad de β‑catenina. La alteración de CDH1 perturba la integridad de la barrera epitelial y promueve programas de desdiferenciación celular como la transición epitelio‑mesénquima, procesos que se estudian con frecuencia en la invasión, fenotipos asociados a la metástasis y la morfogénesis tisular alterada. La pérdida o disfunción de CDH1 es recurrente en cánceres epiteliales y también se ha implicado en el cáncer gástrico difuso hereditario, lo que lo convierte en un locus clave para investigar la señalización dependiente de la adhesión y la homeostasis epitelial en modelos humanos.

E-cadherin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDH1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDH1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDH1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDH1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.