DR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403461-ACT

TNFRSF25 codifica o receptor de morte 3 (DR3), um membro da superfamília de receptores de TNF expresso predominantemente em subpopulações de células imunes, nas quais modula a ativação e a sobrevivência dos linfócitos, bem como a produção de citocinas. O DR3 é ativado por TNFSF15 (TL1A), iniciando uma sinalização proximal ao receptor que pode convergir para as vias de NF-κB e MAPK, moldando programas gênicos inflamatórios e as funções efetoras das células T. Por meio do seu domínio de morte, o DR3 também pode interagir, de forma dependente do contexto, com complexos de sinalização associados à apoptose e à necroptose, conectando a ativação imune à morte celular regulada. A desregulação da sinalização TL1A–DR3 tem sido implicada na inflamação mediada pelo sistema imune e no remodelamento tecidual, tornando o TNFRSF25 um ponto útil para estudar mecanismos de patologia inflamatória crônica e de homeostase imune.

DR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF25 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF25 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF25, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF25 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DR3 em células tumorais com expressão de TNFRSF25 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.