Doublecortin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437358

Descripción general

Doublecortina (DCX) es una proteína neuronal asociada a los microtúbulos que se une a ellos y los estabiliza para regular la dinámica del citoesqueleto durante la neurogénesis. Se expresa en niveles altos en neuroblastos migratorios y neuronas inmaduras, donde favorece el crecimiento de neuritas, la polarización neuronal y la estratificación cortical mediante el control de la polimerización de microtúbulos y del transporte intracelular. DCX se integra en vías que regulan la coordinación actina–microtúbulo, el posicionamiento del centrosoma y la guía axonal, conectando la remodelación del citoesqueleto con los patrones del desarrollo. La alteración de la función de DCX se asocia con anomalías del neurodesarrollo y con cambios en la conectividad neuronal, por lo que se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico en estudios de migración neuronal y desarrollo cerebral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Doublecortin (r) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares rat. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Doublecortin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de Doublecortin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de Doublecortin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Doublecortin CRISPR/Cas9 KO (r) y el plásmido Doublecortin CRISPR/Cas9 KO (r2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Doublecortin (r) y el plásmido HDR Doublecortin (r2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.