Dnmt1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420033-LAC

Das Mausgen *Dnmt1* kodiert die DNA-Methyltransferase 1 (DNMT1), die wichtigste Erhaltungs‑Methyltransferase, die während der S‑Phase CpG‑Methylierungsmuster auf die neu synthetisierte DNA überträgt, um das epigenetische Gedächtnis nach der Replikation zu bewahren. DNMT1 koordiniert mit UHRF1, PCNA und chromatinassoziierten Faktoren, um die Aufrechterhaltung der DNA‑Methylierung mit DNA‑Replikation, Chromatin‑Remodeling, transkriptioneller Repression und Genomstabilität zu koppeln. Durch die Regulation der Methylierung von Promotoren und repetitiven Elementen beeinflusst DNMT1 die Linienfestlegung, genomische Prägung (Imprinting), die X‑Chromosomen‑Inaktivierung und die Unterdrückung transponierbarer Elemente. Eine fehlregulierte DNMT1‑Aktivität oder ‑Expression steht mit den aberranten DNA‑Methylierungslandschaften in Verbindung, die in der Krebsbiologie, bei Entwicklungsdefekten und in Modellen epigenetischer Instabilität beobachtet werden, was ihren Einsatz in Studien zur Genregulation und zu Chromatin‑Zustandsübergängen unterstützt.

Dnmt1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Dnmt1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Dnmt1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Dnmt1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Dnmt1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Dnmt1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.