DMXL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417505-ACT

DMXL2 (Dmx-like 2) codifica uma grande proteína de suporte (scaffold) contendo repetições WD, implicada no tráfego vesicular e na exocitose regulada, dando suporte à dinâmica de membranas em compartimentos secretores e sinápticos. Ao coordenar interações proteína–proteína nas vias endomembranares, a DMXL2 está ligada à função de neurónios e de células endócrinas, incluindo processos que acoplam a maturação, a docagem e a libertação de vesículas. Alterações na expressão ou na função de DMXL2 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a desregulação reprodutiva/endócrina, tornando-a relevante para o estudo do controlo da via secretora em células humanas. Como regulador amplamente expresso do tráfego de membranas, a DMXL2 é frequentemente analisada em modelos de biologia sináptica, secreção hormonal e homeostase celular.

DMXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DMXL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DMXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DMXL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DMXL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DMXL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DMXL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DMXL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DMXL2 em células tumorais com expressão de DMXL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.