Dlx-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405063-ACT

DLX3 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Dlx-3, einen zentralen Regulator epithelial–mesenchymaler Interaktionen, der Genprogramme koordiniert, welche die epidermale Differenzierung, die Entwicklung der Haarfollikel, die Odontogenese sowie die kraniofaziale Morphogenese steuern. Dlx-3 ist Teil entwicklungsbiologischer Transkriptionsnetzwerke mit anderen Mitgliedern der DLX-Familie und integriert Signaleingänge wie BMP und WNT, um die Linienfestlegung und die Barrierebildung zu modulieren. In der Humangenetik ist eine veränderte DLX3-Funktion mit Phänotypen der ektodermalen Dysplasie assoziiert, darunter das Tricho-dento-osseöse Syndrom, wodurch seine transkriptionelle Kontrolle mit Defekten an Haaren, Zahnschmelz und der Knochenhomöostase verknüpft wird. Diese Eigenschaften machen DLX3 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung differenzierungsabhängiger Chromatinzustände, gewebespezifischer Enhancer-Nutzung und genregulatorischer Schaltkreise in Keratinozyten und verwandten Vorläufermodellen.

Dlx-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DLX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dlx-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DLX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DLX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dlx-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DLX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dlx-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dlx-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DLX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.