Plásmido Doble Nickase (h) Dlx-1: sc-405307-NIC

DLX1 codifica el factor de transcripción homeobox Dlx-1, un regulador nuclear esencial para el patrón embrionario y la especificación de linajes, en particular en estructuras craneofaciales y en el desarrollo de interneuronas del prosencéfalo. Dlx-1 modula programas génicos que controlan la diferenciación, la migración y la maduración de progenitores neurales y derivados del ectodermo mediante unión específica a secuencias de ADN y cooperación con otros factores de transcripción del desarrollo. En contextos adultos y de enfermedad, la alteración de la expresión de DLX1 se ha asociado con transiciones de estado celular desreguladas y redes transcripcionales aberrantes descritas en cánceres y trastornos del neurodesarrollo, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de regulación génica. Por ello, DLX1 se estudia ampliamente por su contribución a las cascadas de expresión génica del desarrollo y a la remodelación dependiente del contexto de la identidad celular.

Dlx-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DLX1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DLX1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DLX1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DLX1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.