Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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DGK-ι Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406306
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DGK-ι Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DGK-ι, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DGK-ι Antibody (G-3): sc-166439
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DGK-ι Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406306 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DGKI codifica la diacilglicerolo chinasi iota (DGK-ι), un enzima che fosforila il diacilglicerolo (DAG) generando acido fosfatidico, contribuendo così a determinare l’ampiezza e la durata della segnalazione dei secondi messaggeri lipidici. Limitando la disponibilità di DAG, DGK-ι modula gli effettori a valle responsivi al DAG, come la proteina chinasi C e RasGRP, influenzando vie che regolano il traffico di membrana, la dinamica del citoscheletro e programmi trascrizionali dipendenti dallo stimolo. L’attività di DGK-ι è associata alla regolazione di reti di segnalazione cellulare che coordinano proliferazione, differenziamento e migrazione in molteplici tipi cellulari. Uno squilibrio tra DAG e acido fosfatidico e la segnalazione della famiglia DGK sono stati studiati in contesti quali la biologia del cancro, la segnalazione immunitaria e i processi neurologici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DGK-ι (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DGKI in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DGKI insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DGKI a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DGK-ι.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DGKI per lo studio della segnalazione di DGK-ι, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DGKI critici per la funzione di DGK-ι
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DGKI per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DGK-ι CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DGK-ι CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DGKI. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DGK-ι Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DGK-ι (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DGKI per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DGKI definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.