Plasmide Double Nickase (m) Desmuslin: sc-433269-NIC

Synm code la desmusline, une protéine associée aux filaments intermédiaires, enrichie au niveau du disque Z, qui contribue à l’intégrité du cytosquelette et à la mécanotransduction dans le muscle strié. Chez la souris, la desmusline interagit avec des composants du complexe dystrophine–glycoprotéines et avec des échafaudages sarcolemmiques apparentés afin de coordonner l’organisation des myofibrilles, la transmission de la force et le remodelage en réponse au stress. Ces fonctions relient Synm à des voies impliquées dans l’architecture des cellules musculaires, la signalisation liée à l’adhérence et le maintien de la stabilité de l’appareil contractile. La dérégulation des réseaux de filaments intermédiaires et des protéines associées au disque Z est largement pertinente dans des modèles de cardiomyopathie et de dégénérescence du muscle squelettique, faisant de Synm une cible utile pour disséquer les mécanismes de défaillance du cytosquelette.

Desmuslin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Synm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Synm. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Synm. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Synm.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.