Dematin Plasmide Double Nickase (h): sc-405148-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dematin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dematin Double Nickase Plasmid (h) e il Dematin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DMTN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dematin Plasmide Double Nickase (h) | sc-405148-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dematin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405148-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DMTN codifica la dematina, un regolatore del citoscheletro legante l’actina, arricchito nella corteccia cellulare e nelle interfacce membrana–citoscheletro, dove contribuisce all’organizzazione dei filamenti, alla forma cellulare e alla stabilità meccanica. La dematina si associa al macchinario di rimodellamento dell’actina e sostiene processi quali l’increspamento della membrana (membrane ruffling), la dinamica dell’adesione e l’accoppiamento del citoscheletro ai complessi di segnalazione. In virtù di questi ruoli, DMTN è stato studiato in contesti di alterata architettura e motilità cellulare, spesso implicate nel comportamento delle cellule tumorali e in altri disturbi legati alla disregolazione del citoscheletro. La sua espressione e la perturbazione funzionale forniscono un readout gestibile per le vie che governano la struttura dell’actina corticale, l’integrità cellulare e le risposte allo stress.
Dematin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMTN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMTN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMTN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMTN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.