DDX60 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408255-ACT

DDX60 (helicase 60 da família DEAD-box) é uma helicase de RNA induzível por interferon que atua na imunidade antiviral inata ao detectar e remodelar RNA viral e ao promover a sinalização de interferon do tipo I. Ela tem sido implicada em vias de receptores do tipo RIG-I e na amplificação de programas de expressão gênica antiviral por meio da modulação do metabolismo de RNA e de redes de genes estimulados por interferon. Por sua atividade de helicase, a DDX60 pode influenciar a estabilidade e a tradução do RNA, moldando assim as respostas celulares à infecção e a estímulos inflamatórios. A desregulação da expressão de DDX60 e da atividade da via de interferon tem sido associada a patologia mediada pelo sistema imune e é frequentemente estudada no contexto de interações entre câncer e sistema imune e de estados inflamatórios crônicos.

DDX60 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDX60 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX60 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDX60 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDX60, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX60. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDX60 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX60 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX60 em células tumorais com expressão de DDX60 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.