DDX60 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408255-ACT

DDX60（DEAD-box helicase 60）はインターフェロン誘導性のRNAヘリカーゼで、ウイルスRNAを認識して再構成（リモデリング）し、I型インターフェロンシグナル伝達を促進することで、自然免疫による抗ウイルス防御に機能します。RIG-I様受容体（RLR）経路や、RNA代謝およびインターフェロン刺激遺伝子（ISG）ネットワークの調節を介した抗ウイルス遺伝子発現プログラムの増幅への関与が示唆されています。ヘリカーゼ活性を通じて、DDX60はRNAの安定性や翻訳に影響を与え、感染や炎症性刺激に対する細胞応答を形作ります。DDX60の発現異常やインターフェロン経路活性の破綻は、免疫駆動性の病態と関連することが報告されており、がんと免疫の相互作用や慢性炎症状態の文脈でしばしば研究されています。

DDX60 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDX60の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDX60 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDX60 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDX60転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDX60の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDX60遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDX60依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDX60発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDX60経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。