Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Cytokeratin 19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400281
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cytokeratin 19 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Cytokeratin 19, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cytokeratin 19 Antibody (A-3): sc-376126
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cytokeratin 19 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400281 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KRT19 codifica la citocheratina 19 (CK19), una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che si associa alle cheratine di tipo II per formare il citoscheletro di cheratina nelle cellule epiteliali. CK19 sostiene l’integrità strutturale e la meccanotrasduzione, contribuendo alla polarità cellulare, alla dinamica dell’adesione e alle risposte allo stress attraverso interazioni con complessi desmosomali ed emidesmosomali. Un’alterata espressione di KRT19 è associata agli stati di differenziazione epiteliale e a programmi di rimodellamento come la riparazione delle ferite e la transizione epitelio-mesenchimale, collegandola a cambiamenti nella proliferazione, nella migrazione e nella plasticità cellulare. In biologia del cancro, CK19 è ampiamente utilizzata come marcatore di linea epiteliale ed è spesso studiata in relazione alla progressione tumorale e a fenotipi legati alla metastasi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 19 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KRT19 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KRT19 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KRT19 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cytokeratin 19.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KRT19 per lo studio della segnalazione di Cytokeratin 19, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KRT19 critici per la funzione di Cytokeratin 19
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KRT19 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Cytokeratin 19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cytokeratin 19 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KRT19. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Cytokeratin 19 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cytokeratin 19 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KRT19 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KRT19 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.