Cyr61/CCN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421062-ACT

Cyr61 (CCN1) codifica uma proteína secretada, matricelular, que se liga a integrinas e a proteoglicanos de heparan sulfato para regular a adesão, migração, proliferação e sobrevivência celular na matriz extracelular. CYR61/CCN1 participa de programas angiogênicos e de reparo de feridas e coordena a sinalização por meio das vias de quinase de adesão focal (FAK), MAPK/ERK e PI3K/AKT, ao mesmo tempo que modula a remodelação do citoesqueleto. Em modelos murinos, alterações na atividade de Cyr61 foram associadas a remodelamento tecidual desregulado, inflamação e respostas fibróticas, sendo frequentemente estudado no contexto da biologia vascular e da comunicação cruzada entre estroma e epitélio. Como a CCN1 integra sinais mecânicos e inflamatórios, ela funciona como um ponto útil para investigar a regulação gênica dirigida pelo microambiente em estados relevantes do desenvolvimento e de doenças.

Cyr61/CCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyr61 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cyr61/CCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyr61 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyr61, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cyr61/CCN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyr61 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cyr61/CCN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cyr61/CCN1 em células tumorais com expressão de Cyr61 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.